В мае журнал Clinical Infectious Diseases публикует онлайн обзорную статью Джулии Корнетт и Томаса Кирна из Университета медицины и стоматологии Нью-Джерси (Julia Cornett, Thomas Kirn, UMDNJ), работа посвящена исследованию современных методов лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции у взрослых.

Последние годы наблюдается значительный прогресс в области лабораторной диагностики вирусных инфекций, в том числе и ВИЧ-инфекции: довольно быстро сменяют друг друга генерации тест-систем, происходит и удешевление методов исследований, и повышение их диагностических возможностей.

В середине прошлого десятилетия было установлено, что наибольшие риски передачи ВИЧ-инфекции возникают в острую фазу, спустя непродолжительное время после инфицирования, причем высокие риски передачи в острую фазу практически не связаны с уровнем вирусной нагрузки, а вот к пониманию механизмов этого явления ученые приблизились лишь недавно.

По данным различных исследований установлено, что на недавно инфицированных лиц (менее полугода от даты инфицирования) приходится от трети до половины случаев передачи ВИЧ-инфекции. Впрочем, понимание огромной профилактической роли широкой и ранней диагностики ВИЧ-инфекции пришло к специалистам здравоохранения еще в первые годы после открытия вируса иммунодефицита человека.

Сегодня CDC (Центр по контролю заболеваемости, США) оценивает более чем в 55 000 в год число новых случаев ВИЧ-инфекции в США, и специалисты центра считают, что порядка 20% американцев не знают свой статус. Для Российской Федерации, судя по всему, цифры будут более драматичными — в 2012 году было зарегистрировано 69280 новых случая ВИЧ-инфекции (по данным Г.Онищенко, Всероссийский конгресс по инфекционным болезням в Москве). В настоящее время в мире доминируют скрининговые ИФА (ИФА, enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) тест-системы 3 и 4 поколения. Тест-системы 3 поколения вытеснили предыдущие генерации тест-систем в США в 2007 годы, они способны обнаруживать иммуноглобулины классов M и G к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 и выявлять ВИЧ-инфекцию уже с 3 недели после инфицирования. Системы 4 поколения стали доступны в США в 2010 году, хотя первые коммерческие системы 4 поколения появились в мире на 10 лет раньше. Четвертое поколение тест-систем выявляет не только IgM и IgG к ВИЧ, но и вирусный антиген p24, что позволяет выявить ВИЧ во многих случаях уже через 5-7 дней после инфицирования, а высокое диагностическое значение результаты достигают уже через две недели от сероконверсии (см. рис. ниже).

Подтверждающим методом для диагностики ВИЧ-инфекции сегодня является непрямая иммунофлюоресценция (РНИФ, иммуноблот, вестерн-блот). Иммуноблот демонстрирует высокую чувствительность (99,3-99,7%) и специфичность (99,7%), но так как метод определяет иммунглобулины класса G, то с момента инфицирования результат может быть ложноотрицательным до трех недель.

Диагностические маркеры вирусного иммунодефицита человека

Время возникновения надежной положительной реакции для ИФА тест-систем первого (1), второго (2), третьего (3) и четвертого (4) поколений, методов ПЦР-диагностики (N). АГ — антиген ВИЧ p24, АТ — антитела к ВИЧ, E —эклипс-фаза, ранняя стадия внутриклеточной репликации вируса.
По Cornett JK, Kirn TJ, Clin Infect Dis. 2013 May 10. Адаптация: arvt.ru.

Количественные методы определения РНК или провирусной ДНК ВИЧ (методы полимеразной цепной реакции, ПЦР) не одобрены в США для диагностики ВИЧ-инфекции и применяются для оценки вирусной нагрузки у лиц с установленным диагнозом ВИЧ-инфекции. Для диагностических целей имеет одобрение FDA только качественная методика (Gen-Probe Aptima). Качественная ПЦР с очень высокой вероятностью выявляет ВИЧ-инфекцию в острый период, однако, для хронической ВИЧ-инфекции в 3-5% случаев результат может быть ложноотрицательным. Методы ПЦР крайне требовательны к квалификации лаборантов, соблюдению технологии, а также характеризуются относительно высоким временем выполнения и стоимостью. ПЦР-диагностика играет важную роль для диагностики ВИЧ у новорожденных, где бесполезны ИФА методы и иммуноблот из-за наличия в крови ребенка антител к ВИЧ, полученных от матери.

Экспресс-тесты на антитела к ВИЧ в США одобрены с 2002 года, в том числе ультрабыстрые тесты, чувствительность таких тестов 93% и специфичность — 99%. Однако до сих пор не получил одобрения ни один экспресс-тест, определяющий как антитела, так и антигены, например, Alere Determine HIV 1/2 Ag/Ab Combo, уже одобренный и доступный в РФ. Авторы обзора, впрочем, обращают внимание на то, что способность Alere Determine HIV 1/2 Ag/Ab Combo к обнаружению антигена р24 ВИЧ значительно уступает таковой для коммерческих лабораторных систем 4 поколения. В одном исследовании (n=26) экспресс-тест Alere Determine выявил антиген в 62% случаев, а в другом (n=67) — в 86,6% случаев, в тестовых сыворотках без антител. В двух случаях с известной датой инфицирования Alere Determine дал положительный результат только по антителам к ВИЧ на 35 день.

Тем не менее, несмотря на то, что экспресс-тесты на сегодняшний день уступают возможностям лабораторных ИФА систем 4 поколения, а также остается неразрешенным вопрос о дотестовом и послетестовом консультировании, их широкое применение рассматривается как важная дополнительная возможность тестирования населения на ВИЧ.

• Cornett JK, Kirn TJ. «Laboratory Diagnosis of HIV in Adults: A Review of Current Methods» Clin Infect Dis. 2013 May 10. [Epub ahead of print]